在大型法蘭生產(chǎn)中，影響大型法蘭的性能因素有很多，下面我們說(shuō)下常見(jiàn)的幾個(gè)因素，首先是退火溫度（退火溫度為引物和模板結(jié)合時(shí)候的溫度參數(shù)，當(dāng)50%的引物和互補(bǔ)序列表現(xiàn)為雙鏈DNA分子時(shí)的溫度·它是影響PCR特異性的較重要因素。在理想狀態(tài)下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火， 同時(shí)還要足夠高，以減少非特異性結(jié)合。合理的退火溫度從55℃到70℃。退火溫度一般設(shè)定比引物的 Tm低5℃。
 ）是否達(dá)到規(guī)定溫度Annealing temperature reaches the required temperature。大型法蘭處理一般是采取固溶熱處理，也就是人們平常所謂的“退火”，溫度范圍為1040~1120℃（日本標(biāo)準(zhǔn)）。你也可以通過(guò)退火爐觀察孔觀察，退火區(qū)的大型法蘭管件應(yīng)為白熾狀態(tài)，但沒(méi)出現(xiàn)軟化。